测定植物木质素和酚类化合物 whatman gf/c滤纸|上海摩速科学器材有限公司-j9九游会九游国际版

      测定植物木质素和酚类化合物 whatman gf/c滤纸
测木质素
准备:**锅,电炉1000w, 100毫升或150毫升三角瓶若干,漏斗1个,药匙,玻璃棒,滤纸若干,72%硫酸,乙醇。
   200mg粉末与4毫升72%硫酸在三角瓶中30度脱氢3小时,或将干叶子加硫酸后,用玻棒不断研磨至糊状,在30度3小时。用112毫升蒸馏水稀释入150毫升三角瓶中,用纸封口,高压**2小时。
   将快速砂芯漏斗,事先在80度烘箱烘干后马上记录重量,再烘干称重一次,。将溶液在滤纸中过滤,并用热水冲洗,滤后漏斗80度烘干称重两次。
光度法: 组织用甲醇:氯仿:水=10:5:4, 抽提2次移去色素,再挤压后测定a325吸光度。

酚类物质用folin-ciocalteau 方法(box-1983 water research pp511)
抽提方法:叶子30-40度烘干2天,-15°c冷冻保存。测定前用瓷研钵研磨,过0.45毫米筛。称取10毫克放于2毫升eppendorf管中,加50%丙酮1毫升。将eppendorf管中平放于纸盒内,在室温摇床上黑暗提取2小时,然后4000g(小离心机11500转)离心10分钟(或用0.22微米watermangf/c滤纸过滤),上清液转入一1.5毫升eppendorf管中于冰箱中放置;再将残余用50%丙酮0.5毫升提一次,合并上清,用蒸馏水定容至1.5毫升。取0.8毫升于事先加入pvpp24毫克的2毫升eppendorf管中作pvpp空白(pvpp在酸性或中性条件下才可有效结合酚类为不溶):震荡2小时或者4度冰箱保存过夜,4000g离心。准备长试管,内用滴定管加10毫升蒸馏水,取2支各加入非pvpp提取液和pvpp空白0.1-0.2毫升(狐尾藻0.1毫升,其它草0.2毫升),立即加入碳酸钠1.5毫升与folin-ciocalteau试剂0.5毫升,15-25ºc显色60分钟。用蒸馏水为空白,以1厘米光程测定750纳米吸光度值,并减去试剂空白值(即pvpp检验值)既可,用单宁酸或间苯三酚为基准做标准曲线。单宁酸标准为0、2、4、6、8、10毫克每升(显色液体中浓度)。注意:混匀液体与统一比色杯很重要。注意比色杯在干和湿情况下吸收可能不同。为避免各次之间系统误差,可用丹宁酸(30%丙酮,100mg/250ml)作为标准基准样。光度计在调好零点后,在测定期间注意不要碰到旋钮,可放置一小烧杯于旋钮上。新鲜叶子在-15度下可长期保存。提取液要保存的话加为0.001m的抗坏血酸。

 
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